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氨基酸色谱仪工作原理

2022年04月21日 安宁市机械设备网

氨基酸色谱仪工作原理

氨基酸色谱仪是以强酸性阳离子交换树脂(磺酸基修饰聚苯乙烯-二乙烯基苯)为固定相,采用柱后茚三酮衍生的高效液相色谱仪。

一、氨基酸在pH = 2.2时都带正电荷,在阳离子树脂上都被吸附,但由于酸碱性、极性和分子大小的差异,吸附强度各不相同。二、随着缓冲液的不断洗脱,氨基酸不断地吸附和解吸。三、不同的氨基酸和离子交换树脂的亲和力不同:碱性氨基酸>芳香族氨基酸>中性氨基酸>酸性氨基酸和羟基氨基酸。四、提高流动相pH值,氨基酸正电荷减少,吸附力减弱,较后从离子交换柱上洗脱下来,洗脱顺序是酸性和带羟基氨基酸、中性氨基酸和碱性氨基酸。五、氨基酸与茚三酮反应液在加热的条件下反应(135℃),生成可在570nm和440nm检测到的蓝紫色物质,仲氨酸生成可在440nm检测到的浅黄色物质。六、根据标准品的保留时间进行定性,根据峰面积进行定量。七、氨基酸总量的测定:1、常规酸解法:6N HCl,110℃,24h。可测定15种氨基酸,除含硫氨基酸和色氨酸外。2、含硫氨基酸氧化酸解法:水解前用过甲酸氧化,使胱、半胱氨酸生成磺基丙氨酸,蛋氨酸生成蛋氨酸砜,然后水解测定。HBr为终止剂,可测定除色氨酸、酪氨酸、组氨酸和苯丙氨酸外的蛋白水解氨基酸(14种)。偏重亚硫酸钠(Na2S2O5)为终止剂,可测定除色氨酸和酪氨酸外的蛋白水解氨基酸(16种)。3、碱解法:色氨酸,4mol/L NaOH,110℃,20h。

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